AAT Bioquest  22840  細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*

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AAT Bioquest 細胞計凋亡和壞死多重試劑盒-常備現(xiàn)貨

美國 AAT Bioquest Inc.(前身是 ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術。AATBioquest 的產品幫助 quan shi jie 的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest 會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest  22840  細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*  100Tests，產品簡介：

產品品牌：AAT Bioquest

產品貨號：22840

產品名稱：細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*

產品規(guī)格：100 Tests

AAT Bioquest 細胞計凋亡和壞死多重試劑盒-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest  22840  細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*  100Tests，產品說明：

我們的細胞計™檢測試劑盒是一套用于監(jiān)測細胞活力的工具?？梢允褂枚喾N參數(shù)。該特定試劑盒旨在監(jiān)測細胞凋亡、壞死和健康細胞。細胞凋亡被描述為一種活躍的、程序化的自主細胞分解過程，可避免引發(fā)炎癥。在細胞凋亡中，磷脂酰絲an酸（PS）轉移到質膜的外小葉。作為細胞凋亡初始/中間階段的通用指標，可以在觀察到形態(tài)變化之前檢測到細胞表面磷脂酰絲an酸的外觀。該試劑盒中使用的PS傳感器在與膜PS結合時具有綠色熒光。 壞死已被表征為由環(huán)境擾動引起的被動，意外的細胞死亡，炎癥細胞內容物不受控制地釋放。質膜完整性的喪失，如膜不可滲透的7-AAD（Ex / Em = 546/647 nm）標記細胞核的能力所證明的那樣，是證明晚期細胞凋亡和壞死的直接方法。此外，該試劑盒還提供用于標記活細胞質的活細胞質標記染料細胞鈣黃綠素™紫450（Ex / Em = 405 / 450 nm）。該試劑盒經過優(yōu)化，可通過流式細胞儀和熒光顯微鏡檢測細胞凋亡（綠色）、壞死（綠色和/或紅色）和健康細胞（藍色）。

組件

組分 A：100X Apopxin™ Green  1 瓶 （200 μL）

組分B：檢測緩沖液               1 瓶 （50 mL）

組件 C：200X 7-AAD            1 瓶 （100 μL）

組分D：細胞鈣黃綠素™紫450          1瓶（凍干粉）

1.    用測試化合物制備細胞（200 μL/樣品）

2.    添加阿普辛™綠色檢測液

3.    在室溫下孵育 30 - 60 分鐘

4.    使用帶發(fā)射濾光片的流式細胞儀分析細胞 530/30 nm（FITC通道 - 用于凋亡細胞），450/40 nm（太平洋藍通道 - 用于健康細胞）和670/14 nm（PE-Cy5通道 - 用于壞死細胞）

重要說明：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

1.細胞鈣黃綠素紫450儲備溶液（200X）：

將100μLDMSO加入細胞鈣黃綠素紫450（組分D）的小瓶中，制成200X細胞鈣黃綠素紫450儲備™溶液。™™避光?！?/span>

實驗方案樣本

用Apopxin™Green制備并孵育細胞：

1.    用測試化合物處理細胞一段時間（用星形孢菌素處理的Jurkat細胞為4-6小時）以誘導細胞凋亡。

2.    離心細胞得到1-5×10⁵細胞/管。

3.    將細胞重懸于 200 μL 檢測緩沖液（組分 B）中。

4.    向細胞中加入 2 μL 100X Apopxin ™綠（組分 A）。

5.    可選 1：向壞死細胞中加入 1 μL 200X 7-AAD（組分 C）。

6.    可選 2：然后將 1 μL 200X 細胞鈣黃綠素™紫 450 儲備溶液加入細胞中，用于健康細胞染色。

7.    在室溫下孵育 30 至 60 分鐘，避光。

8.    在用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前，加入 300 μL 測定緩沖液（組分 B）以增加體積。

9.    使用帶有發(fā)射濾光片的流式細胞儀監(jiān)測熒光強度 530/30 nm（FITC通道 - 用于凋亡細胞），450/40 nm（太平洋藍通道 - 用于健康細胞）和670/14 nm（PE-Cy5通道 - 用于壞死細胞）。

使用流式細胞儀分析細胞：

1.    使用帶有發(fā)射濾光片的流式細胞儀定量Apopxin™ Green結合530 / 30 nm（FITC通道 - 用于凋亡細胞），450 / 40 nm（Pacific Blue 通道 - 用于健康細胞）和670 / 14 nm（PE-Cy5通道 - 用于壞死細胞）。注意：Apopxin™與貼壁細胞結合的流式細胞術分析未經常規(guī)測試，因為在細胞分離或收獲過程中可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，利用膜聯(lián)蛋白V對貼壁細胞類型進行流式細胞術的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人報道。

使用熒光顯微鏡分析細胞：

1.    孵育后移液細胞懸液，用檢測緩沖液沖洗1-2次，然后用檢測緩沖液重懸細胞。

2.    將細胞添加到覆蓋有玻璃蓋玻片或黑色壁/透明底部96孔微孔板的載玻片上。注意：對于貼壁細胞，建議直接在蓋玻片（或黑壁/透明底部96孔微孔板）上培養(yǎng)細胞。用Apopxin™ Green孵育后，用檢測緩沖液沖洗1-2次，然后將檢測緩沖液加回蓋玻片（或黑色壁/透明底部96孔微孔板）。在載玻片上倒置蓋玻片并可視化細胞。細胞也可以在與Apopxin™ Green孵育后固定在2%甲醛中，并在顯微鏡下觀察。

3.    使用FITC濾光片在熒光顯微鏡下用Apopxin™ Green分析凋亡細胞。當添加7-AAD時，使用德克薩斯紅過濾器測量細胞活力，當將細胞鈣黃綠素™紫450添加到細胞中時，使用DAPI或紫色過濾器測量細胞活力。質膜上的綠色染色表明Apopxin™ Green與細胞表面的PS結合。

產品訂購信息：

22840  細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*  100Tests